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G3409-5000u recombinante tev protease su etiqueta

Especificación:5000UL
Uso:Retire el MBP, GST, sus u otras proteínas etiquetadas de las proteínas de fusión.
Almacenamiento y transporte:Transporte con hielo mojado; tienda en -20, Válido por 12 meses.
u:
Estado de Disponibilidad:
  • G3409-5000U
  • Servicebio

Descripción del producto

Visión general

La proteasa recombinante TEV es una proteína que expresa la proteasa de cisteína del virus del Etch Tobacco (TEV) con su etiqueta en Escherichia coli. La proteasa TEV es una proteasa de cisteína de uso común, que puede reconocer específicamente la secuencia de heptopéptidos glu-asn-leu-tyr-phe-gln-gly / ser (enlyfqg / s), y realizar la digestión de enzimas entre GLN (Q) y Gly / Ser (G / s) residuos de aminoácidos. La temperatura óptima de la digestión de la proteasa recombinante TEV es de 30 ℃, y la actividad enzimática de la proteasa recombinante TEV es alta en el rango de 29-34. Sin embargo, cuando la temperatura alcanza o supera los 37, la actividad enzimática de la proteasa recombinante TEV disminuye considerablemente. En la operación real, para preservar la estructura y la actividad biológica de la proteína diana en la medida de lo posible, se recomienda utilizar la digestión de enzimas de proteasa TEV durante la noche a 4 ℃. La proteasa de TEV recombinante está activa en el rango de pH de 6.0 a 9.0, pero pierde su actividad enzimática cuando el pH es menor o igual que 5.TEV Protasa todavía tiene una alta actividad en el imidazol de 400 mm. Por lo tanto, para la purificación de la proteína objetivo que contiene su etiqueta por la columna de níquel, la proteasa TEV se puede agregar directamente en la solución de proteína diana purificada que contiene una alta concentración de imidazol. A 4 ℃, el imidazol se elimina por diálisis y la digestión enzimática se realiza al mismo tiempo. También es posible eliminar su etiqueta por la digestión enzimática con TEV protease después de la diálisis. La protease de TEV con su etiqueta en la solución de proteína diana después de la digestión de la enzima y la etiqueta escindida se puede eliminar con unión con una columna de níquel.

Solicitud:A menudo se usa para eliminar MBP, GST, sus u otras proteínas etiquetadas de las proteínas de fusión. TEV PROTEASE tiene su propia etiqueta y puede unirse a la columna de níquel.

Fuente:Tobacco Etch Virus (TEV) proteasa de cisteína, expresión recombinante de Escherichia coli, que contiene su etiqueta.

Definición de actividad enzimática:A 30, PH8.0, 3 μg de sustrato (que contiene el sitio de escisión de proteasa de la proteasa de TEV recombinante) se puede escindir dentro de 1H más del 85% de la unidad de actividad de enzimas requerida.

Inactivación o inhibición:Los inhibidores comunes de la proteasa de la serina, como PMSF, AEBSF, Bestatin, Pepstatin y EDTA, no inhiben la actividad de la proteasa TEV. Los inhibidores de la proteasa dirigidos a los residuos de cisteína, como NEM o IAA, pueden inhibir significativamente la actividad de la proteasa TEV. La proteasa TEV aún mantiene la actividad enzimática más alta en una mayor concentración de imidazol.

Pureza y concentración:Pureza de prueba SDS-PAGE ≥95%, 10 U / μL.

Solución de almacenamiento de proteasa TEV recombinante:Tris-HCl de 50 mm, NaCl de 250 mm, EDTA 1 mM, DTT de 5 mm, 50% (v / v) glicerol, pH 8.0.

10 × tampón TEV:500 mm Tris-HCl, NaCl de 500 mm, EDTA de 5 mm, 10 mm DTT, PH 8.0.


Número de componentes

Componente

G3409-5000U

G3409-1

Protease recombinante TEV (su etiqueta) (10 U / μl)

500 μl

G3409-2

10 × tampón TEV

3 × 1 ml

G3409-3

Proteína de control

100 μl

Uso del producto


1. Recomendación del sistema de digestiónPortenasa

Componente

Volumen

10 × tampón TEV

5 μl

Proteína de interés

30 μg

Protease recombinante TEV (su etiqueta) (10 u / μl)

1 μl

ddh2O

A 50 μl

2. El sistema de reacción se colocó a 30 ℃ por 1-4H. Si la proteína diana no es estable a 30 ℃, el sistema de reacción se puede colocar a 4 ℃ durante la noche para la digestión enzimática (aproximadamente 16H).

3. El ensayo SDS-PAGE se realizó en una muestra de 10 μl de producto de digestión para evaluar la dosis de digestión y las condiciones de reacción.


Notas


1. Los productos enzimáticos deben colocarse en una caja de hielo o baño de hielo, y almacenarse a -20 ℃ inmediatamente después de su uso. Se recomienda el almacenamiento separado.

2. Para su seguridad y salud, utilice una capa de laboratorio y guantes desechables para operar.


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