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Descripción del producto
La proteasa de sumo recombinante (proteasa de modificador relacionada con la ubiquitina pequeña) es una proteasa específica de UBL de UBL (proteasa específica de UBL 1, proteasa específica de la proteína de ubiquitina 1 (ULP1) puede reconocer la estructura terciaria del sumo (similar a una ubiquitina. Modificador) Proteína con alta especificidad. Hidrolizar el enlace peptídico posgly-gly en el péptido X-Gly-Gly-X (excepto Pro) en el terminal carboxi-terminal de la proteína de sumo, de modo que la proteína objetivo liberada después de la escisión de la fusión. La proteína por esta proteasa no contiene exceso de aminoácidos. El pH óptimo y la temperatura para la digestión de la proteasa de sumo fueron de 8.0 y 30. Tiene buena estabilidad y alta actividad enzimática en el rango de pH 6.0-10.0, rango de temperatura 2-30 ℃, fuerza iónica Rango de 0-400 mm Nacl.in Práctica, para preservar la estructura y la actividad biológica de la proteína objetivo en la medida de lo posible, se recomienda utilizar una digestión de proteasa de sumo recombinante a 4 ℃ durante la noche, y al mismo tiempo, agregando apropiado concentración de DTT (0.5-2 mm) en el sistema de digestión puede mejorar significativamente la eficiencia de la digestión.
Aplicación: se usa comúnmente para eliminar la proteína etiquetada del sumo de las proteínas de fusión. La proteasa en sí lleva la etiqueta y se une a la columna de níquel.
Fuente: Saccharomyces Cerevisiae Cysteine protease, expresión recombinante de Escherichia coli, con su etiqueta.
Definición de actividad enzimática: una unidad de actividad enzimática se puede usar para cortar más del 85% de 2 μg de sustrato (que contiene proteína marcada con suma) dentro de 1 h a 30 ℃, PH8.0.
Inactivación o inhibición: imidazol superior a 150 mm afectará la eficiencia de la digestión de la proteasa de sumo recombinante
Pureza y concentración: Pureza de prueba SDS-PAGE ≥95%, 10 U / μL.
Solución de almacenamiento de proteasa sumó recombinante: TRIS-HCl 25 mM, pH 8.0.1% NAP-40,250 mm NaCl, DTT 500 μM, 50% (v / v) glicerol.
10 × tampón de sumo + sal: 500 mm Tris-HCl, pH 8,0,2% NP-40,1.5 m NaCl, 10 mm DTT
10 × Búfer Sumo - Sal: 500 mm Tris-HCl, pH 8,0,2% NP-40,10 mm DTT.
Número de componentes | Componente | G3411-2000U |
G3411-1 | Protease de sumo recombinante (su etiqueta) (10 u / μl) | 200 μl |
G3411-2 | 10 × tampón de sumo + sal | 1 ml |
G3411-3 | 10 × Búfer Sumo - Sal | 1 ml |
G3411-4 | Proteína de control | 100 μl |
1. Recomendación del sistema de digestiónPortenasa
Componente | Volumen |
10 × Búfer Sumo +/- Sal | 5 μl |
Proteína de interés | 20 μg |
Protease recombinante TEV (su etiqueta) (10 u / μl) | 1 μl |
ddh2O | A 50 μl |
2. El sistema de reacción se colocó a 4 ℃ por una reacción durante la noche o 16h;
3. Se tomó 10 μl de muestra de producto de digestión para la detección de la página SDS para evaluar la cantidad de digestión y condiciones de reacción.
1. Los productos enzimáticos deben colocarse en una caja de hielo o baño de hielo antes de su uso. Después del uso, deben almacenarse a -20 ℃ inmediatamente. Se recomienda un almacenamiento separado.
2. Para su seguridad y salud, utilice una capa de laboratorio y guantes desechables para operar.
