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IF555-Tyramide Tyramide Signal Amplification Reactivos de inmunohistoquímica

Volumen: 50UL
Estado de Disponibilidad:
  • G1233-50UL
  • Servicebio

Descripción del producto

IF555-Tiramida

Gato no. g1233-50 μl

Contenidos del paquete:

Número de artículo del producto

nombre del producto

Especificación

IF555-Tiramida

G1233-50 μl

50 μl

Introducción del producto:

Este producto, IF555-Tyramide, es tiramida etiquetada con el colorante fluorescente IF555, utilizado en la tecnología de amplificación de señal de tiramida (Amplificación de la señal TSA, TYRAMIDE), en lo sucesivo denominada tecnología TSA. El principio principal de la tecnología TSA: en presencia de peróxido de hidrógeno H2O2, HRP de peroxidasa de rábano picante puede catalizar la tiramina en un intermedio de corta duración muy activo. En poco tiempo, el intermedio se puede unir covalentemente a los complejos de tiramina de proteína circundante se forman en la superficie rica en electrones, que se enriquece en un gran número de agregados similares a \"islas\" centrados en la enzimas.

Debido al colorante fluorescente IF555 etiquetado con la tiramina, se forma una gran cantidad de deposición de fluoresceína en el sitio de unión a antígeno-anticuerpo para lograr la amplificación de la señal. Además, se pueden repetir múltiples inmunolabeling varias veces, utilizando diferentes tiraminas fluorescentes para lograr múltiples tinciones fluorescentes.

Los datos del espectro de fluorescencia de los productos de la serie son los siguientes:

Artículo No.

Nombre del producto

Especificación

Ex / em

G1222-50 μl

FITC-Tyramide

50 μl

492/518

G1223-50 μl

Cy3-tiramida

50 μl

555/569

G1231-50 μl

IF488-Tiramida

50 μl

491/516

G1233-50 μl

IF555-Tiramida

50 μl

557/570

G1232-50 μl

IF647-Tiramida

50 μl

656/670

Condiciones de almacenaje:

Paquetes de hielo Transporte, tienda a -20 ° C, período válido es de 12 meses.

Instrucciones

Tomando las diapositivas de tejido como ejemplo, el agua en los siguientes pasos experimentales es el agua pura, y los reactivos involucrados se refieren a los productos relacionados con ServiceBIO:

1. Depadofiniza las secciones de tejido al agua;

2. Recuperación de antígeno: de acuerdo con el anticuerpo primario utilizado y el tipo de muestra, use un método apropiado para realizar la recuperación de antígenos en la sección de tejidos. 1 × PBS (G4202 o G0002) se lava 3 veces, 5 min cada vez;

3. Use una pluma de Papanicolaou para círculo y marque el tejido;

4. (Opcional) Agregue el tejido de autofluorescencia del tejido (solución G1221A recomendada) al tejido, incube a temperatura ambiente durante 30 minutos y lavado durante 5 min;

5. Inactivar la peroxidasa endógena: agregue un 3% de H2O2 a la sección para cubrir el tejido, e incubar en la oscuridad a temperatura ambiente durante 25 minutos, para bloquear la peroxidasa endógena para reducir la tinción de fondo no específica. Lave 3 veces con 1 × PBS, 5 min cada vez;

6. Bloque: después de que las diapositivas se secan ligeramente, se agrega gota a gota BSA del 3% o suero para sellar durante 30 minutos. Si el anticuerpo primario es de origen de cabra, bloquee con un 10% de suero de burro, y bloquee con un 3% de BSA para otras fuentes;

7. Incubar el anticuerpo primario: diluir el anticuerpo primario a una concentración apropiada con 1 × PBS o solución de bloqueo (G2010). Sacude suavemente la solución de bloqueo en la sección, agregue el anticuerpo primario diluido gota a gota para cubrir el tejido, y coloque la sección plana en una caja de cámara húmeda con agua e incube durante la noche a 4 ° C. Lave 3 veces con 1 × PBS, 5 min cada vez;

8. Incubar el anticuerpo secundario marcado con HRP: diluir el anticuerpo secundario a una concentración apropiada con 1 × PBS o solución de bloqueo (se recomienda G2010), agregue el anticuerpo secundario gota a gota al tejido, y incube a temperatura ambiente durante 50 min. Lave 3 veces con 1 × PBS, 5 min cada vez;

9. Dilute IF555-Tyramide1: 500 con TBST (agregue H2O2 a la concentración final de 0.03 ‰, w / v antes de usar) para preparar la solución de trabajo de tinción TSA. Agregue 100 μl de solución de trabajo de tinción a cada muestra, e incube durante 10 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. Lave con 1 × PBS 3 veces, 5 min cada vez; (NOTA: Se recomienda preparar una solución de trabajo de tinción TSA para uso actual, y debe almacenarse a 4 ° C y está protegido de la luz. Es efectivo dentro de las 24 horas)

10. Tratamiento de microondas: la sección de tejido se coloca en una caja de reparación llena con solución de recuperación de antígenos (elija la solución de recuperación de antígeno apropiada de acuerdo con el tipo de tejido y el anticuerpo) para el tratamiento con calentamiento de microondas para eliminar los anticuerpos primarios y secundarios unidos. En este paso, es necesario prevenir los copos secos causados ​​por la evaporación excesiva de líquidos.

(Nota: Si necesita realizar una tinción fluorescente doble o múltiple, continúe de acuerdo con este paso. Si no necesita realizar una tinción fluorescente doble o múltiple, omita este paso y continúe con el Paso 12)

11. Repita los pasos 7-10, incube el segundo anticuerpo primario, el anticuerpo secundario y la etiqueta TSA, y el tratamiento con microondas para eliminar el anticuerpo primario y el anticuerpo secundario.

12. Núcleo contemporáneo con DAPI: después de que las secciones se secan ligeramente, agregue una solución de tinción DAPI (G1012 recomendada) al tejido, e incube durante 10 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. Lave 3 veces con 1 × PBS, 5min cada vez.

13. (Opcional) Apagado de la autofluorescencia del tejido: agregue AutoFluorescence Husencher (Solución G1221B recomendada) gota a gota al tejido, incube a temperatura ambiente durante 5 minutos y enjuague con agua corriente durante 3 minutos.

14. EXAMEN DE MONTAJE Y MICROSCÓPICO: Después de que las secciones se secan ligeramente, agregue las tabletas de montaje de apagado anticuorescente (G1401). Seleccione el canal de fluorescencia apropiado para observar y recopilar imágenes. Las diapositivas se pueden almacenar durante 15 días a 4 ° C en una caja de diapositivas a prueba de luz.

Precauciones

1. Después de que el producto se haya derretido a temperatura ambiente, use una centrífuga para una centrifugación corta, y use una punta de succión limpia después de soplar y mezclar.

2. En comparación con el anticuerpo secundario fluorescente, el kit de TSA tiene una mayor sensibilidad y una señal más fuerte. Por lo tanto, la concentración del anticuerpo primario debe reducirse, generalmente en 5 a 10 veces en base a la relación de dilución recomendada en el manual de anticuerpos, para reducir la fluorescencia de fondo causada por una unión no específica. Se recomienda establecer la concentración de degradado del anticuerpo primario para obtener el mejor efecto.

3. Si la fluorescencia de fondo es fuerte, se recomienda agregar un paso de apagado de autofluorescencia de tejido.

4. La relación de dilución recomendada de tiramida fluorescente es de 1: 500, y la relación de dilución se puede ajustar de acuerdo con los resultados experimentales (el rango de relación de dilución recomendada es 1: 200-1: 1000).

5. Para múltiples etiquetas fluorescentes, se recomienda incubar primero el anticuerpo policlonal, luego incube el anticuerpo monoclonal; Incube el anticuerpo correspondiente a la proteína objetivo de baja abundancia primero, y luego incube el anticuerpo correspondiente a la proteína objetivo de gran abundancia.

6. Por favor, use la capa de laboratorio y los guantes desechables durante la operación.

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