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Kit de detección cuantitativa de proteína BCA

Estado de Disponibilidad:
  • G2026-1000t

Descripción del producto

Introducción del producto:

Hay dos métodos más utilizados para la detección cuantitativa de la concentración de proteínas: Bradford y BCA. El principio básico de la detección cuantitativa de proteínas por método BCA se basa en la reacción de biuret, es decir, la CU2 + se reduce en condiciones alcalinas CU +, y luego quelante con BCA (ácido bicincónico, un agente cromogénico). Cada molécula quelea un Cu, para formar un complejo soluble en agua púrpura. La sustancia tiene el valor de absorción más alto a 562 nm y la profundidad de color es proporcional a la concentración de proteínas, por lo que se puede usar para la detección cuantitativa de proteínas, la concentración de proteínas tiene una buena relación lineal en la concentración del rango de 50-2000 μg / ml.

Este método no se ve afectado por las sustancias químicas en la mayoría de las muestras, compatibles con altas concentraciones de removedor de escala, SDS, con concentraciones de hasta un 5% incluido el 5% de Triton X-100, 5% de Tween-20,60,80, etc. . Pero los agentes quelantes y las altas concentraciones de agentes reductores afectan los resultados, asegúrese de que no haya EGTA, en muestras de concentración de EDTA por debajo de 10 mm, DTT Menos de 1 mm, β-mercaptoetanol está por debajo de 1 mm. Si la muestra contiene un agente de quelante o un agente reductor, considere nuestros otros productos G2001 Kit de detección cuantitativa de proteínas Bradford.

Contenidos del paquete:

Gato. No.

Descripción del Producto

Volumen

G2026

Kit de detección cuantitativa de proteína BCA

1000t

Componentes:

Número de componentes

Componente

G2026-1000t

G2026-1

Reactivo BCA

2 × 100 ml

G2026-2

Solución de sulfato de cobre

5 × 1.2 ml

G2026-3

BSA

5 × 25 mg

G2026-4

Solución BSA

5 × 1.5 ml

Condición de almacenamiento:

Todo el kit de reactivos se puede transportar a temperatura ambiente; El estándar de proteínas (BSA) se almacena a 4 ℃, válido por 12 meses. Después de la solución estándar de proteínas, se almacena a -20 ℃ y se usa dentro de los 6 meses. Los reactivos restantes se almacenan a temperatura ambiente y son válidos durante 12 meses.

Uso:

1. Solución de reserva estándar de proteínas: la solución de preparación estándar de proteínas de 1 ml se agregó al tubo estándar de la proteína BSA, y se disolvió completamente 25 mg de proteína, que se obtuvo la solución de reserva estándar de proteínas con concentración de 25 mg / ml. La solución estándar de proteínas se puede conservar durante -20 durante mucho tiempo.

2. Preparación de la solución de trabajo estándar de proteínas: tome la cantidad adecuada de una solución de reserva estándar de proteínas de 25 mg / ml, diluya 50 veces con PBS o solución salina normal, obtenga la solución de trabajo de la proteína estándar con concentración final de 0.5mg / ml. Preste atención a la dilución de acuerdo con el método de gradiente 10 veces para garantizar una dilución precisa.

3. Curva estándar (método de etiquetado enzimático): la solución de trabajo estándar de proteínas se agregó a 96 pocillos de acuerdo con 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20UL, respectivamente, y luego agregó 20, 19, 18, 16 , 12, 8, 4, 0ul con PBS o solución salina normal, y luego la solución de trabajo de gradiente se reponen a 20UL. Luego se obtuvo la curva de degradado de la concentración de proteínas de 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500UM / ml.

4. Preparación de muestras a prueba: las muestras de proteínas a probar se diluyan correctamente (la concentración de proteína de la muestra se puede detectar en la curva estándar para garantizar que los resultados de la prueba sean creíbles) y se agregan a la placa de 96 pocillos de acuerdo con La cantidad de 20 μl por muestra. La muestra que se va a probar y el estándar de proteínas se diluyó con la misma solución.

5. Preparación de la solución de trabajo cromogénica BCA: el reactivo BCA y la solución de sulfato de cobre se mezclaron uniformemente de acuerdo con 50: 1 relación de volumen para obtener la solución de trabajo cromogénica BCA. El fluido de trabajo cromogénico BCA se puede almacenar a temperatura ambiente durante 24 h. Cada muestra que se analizará necesita 200 μl, sugirió estar preparado a pedido para evitar el desperdicio.

6. Prueba: agregue 200 μl, de fluido de trabajo cromogénico BCA al orificio de la muestra de la curva estándar y el orificio de la muestra que se debe probar bien (96 placa de pila se puede colocar en el oscilador durante 30 años), 37 después de 30 minutos de reacción, utilizando curva estándar 0 Como referencia, colorimetría a 562 nm longitud de onda, registre la absorbancia de cada hoyo. (Nota: la reacción también puede estar a temperatura ambiente 2 h, o 60 ℃ reacción 30 min. Si la concentración de proteína es baja, se recomienda a 60 reacción)

7. Cálculo: la curva estándar se dibuja con contenido de proteína degradado (μg / ml) como la coordenada horizontal y la absorción que la coordenada vertical. De acuerdo con la absorción de la muestra, la concentración de proteínas (μg / ml) de la muestra a prueba en el orificio correspondiente se puede encontrar en la curva estándar, y luego multiplicada por la dilución múltiple de la muestra es la concentración de proteínas real de La muestra a ser probada.

Notas:

1. La detección cuantitativa de la proteína BCA se ve muy afectada por la temperatura y el tiempo, el valor de absorbancia cambiará con la prolongación del tiempo o el aumento de la temperatura. Si el tiempo y la temperatura de la reacción de color no pueden controlarse con precisión, se sugiere que se debe hacer una curva estándar para cada determinación.

2. Al preparar la solución de reserva estándar de proteínas, es necesario garantizar suficiente disolución. Al diluir la solución de trabajo de la proteína estándar, se recomienda diluir 10 veces degradado, no diluir 50 veces a la vez, para evitar un gran error.

3. Para garantizar la cuantificación precisa de la proteína, es mejor elegir la misma solución de tampón para la extracción de muestras y la dilución del estándar de proteínas, que es consistente con las condiciones de detección. Si el búfer en sí tiene un alto valor de fondo, se recomienda usar otros métodos.

4. Por favor, use ropa de laboratorio y guantes desechables durante la operación.

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