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Kit de detección de apoptosis de células ANEXO V-FITC / PI

Volumen: 50t
Estado de Disponibilidad:
  • G1511-50t
  • Servicebio
  • Servicebio

Descripción del producto


Información del Producto:

Nombre del producto

Gato. No.

Volumen

Kit de detección de apoptosis de células ANEXO V-FITC / PI

G1511-50t

50t

G1511-100t

100T

Descripción del Producto:

La apoptosis es un proceso fisiológico normal que ocurre en el proceso de desarrollo embrionario y mantenimiento de la homeostasis tisular. Está acompañado de muchos cambios morfológicos. Entre ellos, la pérdida de la membrana celular es una de las características tempranas de la apoptosis. En las células normales, la fosfotidilserina (PS) solo se distribuye en el lado interno de la bicapa de fosfolípido de la membrana celular. Sin embargo, en la etapa temprana de la apoptosis, PS se deslizará desde el lado interior de la membrana lipídica hasta el lado exterior, exponiéndolo al exterior de la celda. La anexina V (anexina V) es una proteína de unión a fosfolípidos más dependientes de CA2 + que tiene una alta afinidad para PS y se une específicamente a las células expuestas a PS. Por lo tanto, la anexina V se utiliza como uno de los indicadores para detectar la apoptosis de células tempranas. El yoduro de propidio (PI) es un tinte de ácido nucleico. No puede penetrar en las células normales con membranas celulares intactas y células apoptóticas tempranas, pero pueden penetrar en las membranas celulares de las células apoptóticas y necróticas tardías y manchan el núcleo.

Este producto utiliza FITC para etiquetar la anexina V como una sonda de detección para detectar la apoptosis de células tempranas. Al mismo tiempo, PI se usa para distinguir las células sobrevivientes de células apoptóticas necróticas y tardías. El uso combinado de la anexina V-FITC y PI, las células vivas muestran una tinción negativa (anexina V- / pii), las células apoptóticas tempranas muestran positivos de fluorescencia única (anexina V + / pi-), y células apoptóticas tardías y células necróticas muestran positivo de fluorescencia dual. (Anexoin V + / PI +). Este kit es adecuado para la citometría de flujo o la detección de microscopio de fluorescencia.

Almacenamiento y transporte.

Bolso de hielo (hielo húmedo) Transporte;

Este kit se almacena a -20 ° C y tiene un período de validez de 12 meses.

Componente:

Número de componentes

Componente

G1501-50T

G1501-100T

G1511-1

Anexoin V-FITC

250 μl

2 × 250 μl

G1511-2

Ioduro de propidio (PI)

250 μl

2 × 250 μl

G1511-3

1 × Buffer de unión

25 ml

2 × 25 ml

Manual del usuario del producto

1 PC

Pasos de operación:

1. Células de suspensión: tome la suspensión celular y recoja las células por centrifugación a 500 g durante 5 min a 4 ° C;

Células adherentes: primero recoge el sobrenadante del cultivo celular. Después de la digestión con tripsina libre de EDTA (G4002 recomendada), combine con el sobrenadante del cultivo celular y recoja las células por centrifugación a 500 g a 4 ° C durante 5 min. El tiempo de digestión de tripsina no debe ser demasiado largo, a fin de evitar la digestión excesiva y causar falsos positivos.

2. Lave las células dos veces con PBS previamente enfriado (G4202 recomendado) y recoja las células por centrifugación a 500 g cada vez durante 5 minutos a 4 ° C;

3. Resuspenda suavemente las células en el tampón de unión 1 × pre-enfriado y ajuste la concentración de la celda a 1 ~ 5 × 106 / ml;

4. Tomar 100 μl de suspensión celular, agregue 5 μl de anexina V-FITC y 5 μl PI, mezcle suavemente y proteja de la luz a temperatura ambiente durante 8-10 min;

5. Agregue 400 μl de tampón de unión 1 × pre-enfriado, agite suavemente y realice la detección con un citómetro de flujo o un microscopio de fluorescencia dentro de 1 h.

Análisis de resultados

1. Citometría de flujo

un. Seleccione el voltaje apropiado y ajuste la compensación de la luz durante la detección y el análisis de citometría de flujo. Se recomienda establecer un control negativo (sin la anexina V-FITC y las etiquetas PI) para ajustar el voltaje, excepto el grupo experimental, y un control de una sola etiqueta (solo se agrega la anexina). Las células V-FITC y SOLO PI) se utilizan para ajustar y compensar;

B. Ejemplos de referencia de detección y análisis de citometría de flujo:

Las células de linfoma de Jurkat T se indujeron con 5 μM de camtotecina durante 6 horas. Consulte el procedimiento experimental anterior y use la citometría de flujo para detectar los resultados. Los resultados se muestran en la siguiente figura.

La longitud de onda de excitación máxima de FITC es de 488 nm y la longitud de onda de emisión máxima es de 525 nm; La longitud de onda de excitación máxima del complejo PI-ADN es de 535 nm y la longitud de onda de emisión máxima es de 615 nm. El diagrama de punto de dos dispersión fue extraído por el software de análisis relevante del citómetro de flujo, y la FITC estaba en la abscisa y la PI estaba en la ordenada. En un experimento típico, las células vivas no tienen fluorescencia, y los puntos dispersos están en el primer cuadrante de la parte inferior izquierda. Las células apoptóticas en la etapa temprana tienen una fluorescencia verde fuerte, y los puntos dispersos se encuentran en el segundo cuadrante de la parte inferior derecha. Las células apoptóticas tardías y las células necróticas muestran fluorescencia de doble fluorescencia roja y verde, y los puntos dispersos se encuentran en el tercer cuadrante de la parte superior derecha.

2. Inspección de microscopio de fluorescencia.

Agregue 5-10 μl de suspensión celular de doble manchada con anexina V-FITC y PI en la corredera de vidrio, cubierta con un vidrio de cubierta, y observe debajo de un microscopio de fluorescencia con un filtro de dos colores. La anexina V-FITC presenta una señal fluorescente verde. PI tiene una señal fluorescente roja.

Nota:

1. Durante todo el experimento, la operación debe ser lo más suave posible para evitar la rotura celular y afectar los resultados experimentales.

2. Lavar las células con PBS no se puede omitir, y al mismo tiempo, retire los PBS residuales tanto como sea posible.

3. Cuando utilice la tripsina para digerir las células, debe tener cuidado de evitar daños artificiales a las células y controlar el tiempo de digestión. Si el tiempo de digestión es demasiado corto, las células deben ser sopladas para caerse, lo que es probable que cause daños mecánicos en la membrana celular; Si el tiempo de digestión es demasiado largo, la membrana celular también es vulnerable al daño. Afecta los resultados de las pruebas. Además, no se puede utilizar pancreatina que contiene EDTA. EDTA afectará la unión de la anexina V y Ps.

4. Después de que las células adherentes se estimulan por apoptosis, si algunas de las células flotan, es necesario recolectar el sobrenadante del cultivo celular y las células adherentes y las manchan al mismo tiempo, lo que hará que los resultados sean más precisos.

5. La anexina V-FITC y PI son sensibles a la luz, evite la luz durante la operación. La prueba debe llevarse a cabo lo antes posible después de la reacción.

6. Por favor, use ropa de laboratorio y guantes desechables durante el experimento para evitar la contaminación y garantizar la seguridad.

G1511-50taReactivo -1 (1)

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