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Kit de detección de apoptosis de células PI de Anexina V-if488 / PI

Volumen: 50t
Estado de Disponibilidad:
  • G1513-50T
  • Servicebio
  • Servicebio

Descripción del producto

Información del Producto:

Nombre del producto

Gato. No.

Volumen

Kit de detección de apoptosis de células Anexina V-if488PI

G1513-50T

50t

G1513-100t

100T

Descripción del Producto:

La apoptosis es un proceso fisiológico normal que ocurre en el proceso de desarrollo embrionario y mantenimiento de la homeostasis tisular. Está acompañado de muchos cambios morfológicos. Entre ellos, la pérdida de la membrana celular es una de las características tempranas de la apoptosis. En las células normales, la fosfotidilserina (PS) solo se distribuye en el lado interior de la bicapa fosfolípida de la membrana celular, pero en la etapa temprana de la apoptosis, PS se altará del lado interno de la membrana lipídica al lado exterior, exponiéndolo al exterior de la celda. La anexina V (anexina V) es una proteína de unión a fosfolípidos más dependientes de CA2 + con alta afinidad por PS y se une específicamente a las células expuestas a Ps. Por lo tanto, la anexina V se utiliza como uno de los indicadores para detectar la apoptosis de células tempranas. El yoduro de propidio (PI) es un tinte de ácido nucleico. No puede penetrar en las células normales con membranas celulares intactas y células apoptóticas tempranas, pero pueden penetrar en las membranas celulares de las células apoptóticas y necróticas tardías y manchan el núcleo.

Este producto utiliza la ornexina V de la molécula de colorante fluorescente IF488 como una sonda de detección para detectar la apoptosis de células tempranas. Al mismo tiempo, PI se usa para distinguir las células sobrevivientes de células apoptóticas necróticas y tardías. Cuando se usa la anexina V-if488 en combinación con PI, las células vivas muestran una tinción negativa (anexina V- / PII), las células apoptóticas tempranas muestran un positivo de fluorescencia única (anexina V + / PII), y células apoptóticas tardías y células necróticas muestran duales. Positivo de fluorescencia (anexina V + / PI +). Este kit es adecuado para la citometría de flujo o la detección de microscopio de fluorescencia.

Almacenamiento y transporte.

Transporte en hielo mojado; Almacenar a 2-8 ° C en la oscuridad, válida por 12 meses.

Componente:

Número de componentes

Componente

G1513-50T

G1513-100t

G1513-1

Anexina V-if488

250 μl

2 × 250 μl

G1513-2

Ioduro de propidio (PI)

250 μl

2 × 250 μl

G1513-3

1 × Buffer de unión

25 ml

2 × 25 ml

Manual del usuario del producto

1 PC

Pasos de operación:

1. Células de suspensión: tome la suspensión celular y recoja las células por centrifugación a 500 g durante 5 min a 4 ° C;

Células adherentes: primero recoge el sobrenadante del cultivo celular. Después de la digestión con la tripsina libre de EDTA (G4002 recomendada), combine con el sobrenadante del cultivo celular y recoja las células por centrifugación a 500 g durante 5 minutos a 4 ° C. El tiempo de digestión de tripsina no debe ser demasiado largo, a fin de evitar la digestión excesiva y causar falsos positivos.

2. Lave las células dos veces con PBS previamente enfriado (G4202 recomendado) y recoja las células por centrifugación a 500 g cada vez durante 5 minutos a 4 ° C;

3. Resuspenda suavemente las células en el tampón de unión 1 × pre-enfriado y ajuste la concentración de la celda a 1 ~ 5 × 106 / ml;

4. Tomar 100 μl de suspensión celular, agregue 5 μl de anexina V-if488 y 5 μl PI, mezcle suavemente y proteja de la luz a temperatura ambiente durante 8-10 min;

5. Agregue 400 μl de tampón de unión 1 × pre-enfriado, agite suavemente y realice la detección con un citómetro de flujo o un microscopio de fluorescencia dentro de 1 h.

Análisis de resultados

1. Citometría de flujo

un. Seleccione el voltaje apropiado y ajuste la compensación de la luz durante la detección y el análisis de citometría de flujo. Se recomienda establecer un control negativo (sin ningún marcador) para ajustar el voltaje, excepto el grupo experimental, y un control de una sola etiqueta (solo anexina V-if488 y solo agregue PI) para ajuste y compensación;

B. Ejemplos de referencia para detección y análisis de citometría de flujo:

Las células de linfoma de Jurkat T se indujeron con 5 μM de camtotecina durante 6 h. Consulte el procedimiento experimental anterior y use la citometría de flujo para detectar los resultados. Los resultados se muestran en la siguiente figura.

La longitud de onda de excitación máxima de IF488 es de 491 nm y la longitud de onda de emisión máxima es de 518 nm; La longitud de onda de excitación máxima del complejo PI-ADN es de 535 nm y la longitud de onda de emisión máxima es de 615 nm. Dibuje un gráfico de puntos de dos dispersión utilizando el software de análisis relevante del citómetro de flujo, con IF488 en la abscisa y PI en la ordenada. En un experimento típico, las células vivas no tienen fluorescencia, y los puntos dispersos están en el primer cuadrante de la parte inferior izquierda. Las células apoptóticas en la etapa temprana tienen una fluorescencia verde fuerte, y los puntos dispersos se encuentran en el segundo cuadrante de la parte inferior derecha. Las células apoptóticas tardías y las células necróticas muestran fluorescencia de doble fluorescencia roja y verde, y los puntos dispersos se encuentran en el tercer cuadrante de la parte superior derecha.

2. Inspección de microscopio de fluorescencia.

Agregue 6 μl de anexina V-if488 y PI Suspensión de células de doble manchada en el deslizamiento de vidrio, cuélgalo con un vidrio de cubierta, y observe debajo de un microscopio de fluorescencia con un filtro de dos colores. La anexina V-if488 tiene una señal de fluorescencia verde y PI es una señal de fluorescencia roja.

Notas:

1. Durante todo el experimento, la operación debe ser lo más suave posible para evitar la rotura celular y afectar los resultados experimentales.

2. Lavar las células con PBS no se puede omitir, y al mismo tiempo, retire los PBS residuales tanto como sea posible.

3. Si la pancreatina se usa durante la operación, asegúrese de terminar la digestión con suero y elimine la pancreatina residual lo más posible.

4. Una vez estimulada la apoptosis de células adherentes, algunas células flotan, y las células en el sobrenadante del cultivo celular se recogerán al mismo tiempo, lo que hará que el resultado sea más preciso.

5. La apoptosis es un proceso continuo y dinámico, y la sustancia fluorescente se apagará, por lo que la detección debe llevarse a cabo lo antes posible después de la reacción, y todo el proceso también debe protegerse de la luz tanto como sea posible.

6. Se recomienda la detección de apoptosis de células tempranas para realizar experimentos preliminares para optimizar los pasos correspondientes.

7. Por favor, use ropa de laboratorio y guantes desechables durante el experimento para evitar la contaminación y garantizar la seguridad.

¡Este producto es solo para fines de investigación científica, no para el diagnóstico clínico!

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