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Kit de detección de ciclo celular y apoptosis

Volumen: 50t

Estado de Disponibilidad:
  • G1700-50T
  • Servicebio

Descripción del producto

Información del Producto

nombre del producto

Gato. No.

Especificación

Kit de detección de ciclo celular y apoptosis

G1700-50T

50t

Introducción del producto:

El ciclo celular se refiere a todo el proceso de que una celda pasa desde la finalización de una división hasta el final de la próxima división. Se divide principalmente en dos fases: la interfasa y la mitosis (fase M); La fase intercelular se compone principalmente de la propuesta de síntesis de ADN (fase G1). ), Fase de síntesis de ADN (fase S) y síntesis de ADN tardía (fase G2). La secuencia de cambios en todo el ciclo celular puede representarse por G1 → S → G2 → M. Primero, el período G1: la celda sintetiza principalmente la ARN y la proteína y otras sustancias para preparar la célula para el material y la energía para ingresar a la fase S; Luego ingresa la fase S: ​​la celda comienza a sintetizar el ADN y las histonias, y el contenido del ADN de la celda comienza a aumentar; Finalmente, a la etapa G2: en este momento, el contenido de ADN de la célula se ha convertido el doble que el período G1, y se ha detenido la replicación de ADN, y se sintetiza una gran cantidad de proteínas y otras sustancias para ingresar al período de mitosis; Si G0 (células deja temporalmente el período de división y la diferenciación), la fase quiescente) / fase G1, el contenido de ADN en la celda es 1N; Luego, el contenido de ADN en la celda en la fase G2 es 2N; y la célula de fase S en la fase G1 y G2, el contenido de ADN está entre 1N y 2N; Y en células apoptóticas, el núcleo sufrirá condensación y fragmentación de ADN, lo que resultó en la pérdida de algunos fragmentos genómicos de ADN, por lo que su contenido de ADN es inferior a 1N. El llamado pico Sub-G1 aparece en la imagen de fluorescencia de la citometría de flujo, es decir, las células apoptóticas. cima. Por lo tanto, el ciclo y el estado de la célula se pueden juzgar de acuerdo con el contenido del ADN celular.

La apoptosis también se puede detectar observando los cambios en la dispersión de la luz de las células con un citómetro de flujo. Cuando una célula sufre apoptosis, los cuerpos apoptóticos se producen debido a la condensación del citoplasma y la cromatina y la fragmentación nuclear, que cambia las propiedades de dispersión de la luz de la célula. En la etapa temprana de la apoptosis, la cromatina se reduce, la densidad celular aumenta, y el color de dispersión de la luz de ángulo hacia adelante se reduce significativamente; En la etapa tardía de la apoptosis, las células producen cuerpos apoptóticos, y la dispersión de la luz de la luz del ángulo hacia adelante y la dispersión de la luz de ángulo lateral se reducen significativamente.

El ciclo celular y el kit de análisis de apoptosis utilizan el método de tinción de propidio clásico para detectar y analizar el ciclo celular y la apoptosis. El uso del yoduro de propidio se puede incrustar en el ADN de doble cadena y hacerlo fluorescente, y la intensidad de la fluorescencia es proporcional al contenido del ADN de doble cadena; Combinado con los cambios regulares en el contenido de ADN en diferentes ciclos de células, puede distinguir el ciclo celular y el estado. Este kit se puede utilizar para el ciclo celular y la detección de apoptosis de células de tejido, células adherentes o suspendidas (si se usa para el ciclo celular del tejido y la detección de apoptosis, el tejido debe digerirse en un solo estado celular antes de que se pueda realizar la detección).

Almacenamiento y transporte.

Transporte en hielo mojado; almacenar en la oscuridad a -20 ° C, y almacenar en tampón de tinción a 4 ° C; Válido por 12 meses.

Componente

Número de componentes

Componente

G1700-50T

G1700-1

Solución de tinción PI (50 ×)

500 μl

G1700-2

RNase un reactivo (50 ×)

500 μl

G1700-3

Tampón de tinción

25 ml

Manual del usuario del producto

1 PC

Preparación de experimentos

1. Medio de cultivo celular que contiene suero;

2. Solución de digestión de tripsina (G4001 se recomienda);

3. Buffer PBS (G4202 recomendado);

4. 75% de etanol.

Pasos de operación:

1. Preparación de la muestra de celda (el número de células se controla a 1 × 105 ~ 1 × 106)

1.1. Para celdas adherentes: retire el medio de cultivo, agregue la solución de digestión de tripsina para digerir las células, observe las células para volverse redondas y sueltas debajo del microscopio, agregue una cantidad apropiada de medio de cultivo celular que contiene suero para detener la digestión, elimine suavemente las celdas para hacer la suspensión de las células; Transfiera la suspensión a un tubo de centrífuga, centrifugar a 1000 g durante 3-5 min, deseche el sobrenadante y retenga el sedimento de células; Luego, enjuague la pellet de la célula con un tampón PBS antes enfriado durante 1-2 veces, centrifugar y descartar el sobrenadante de la misma manera, mantenga el sedimento celular.

1.2. Para celdas suspendidas: transferir directamente las células a un tubo de centrífuga, centrifugar a 1000 g durante 3-5 min, deseche el sobrenadante y retenga el sedimento de células; Luego, enjuague la pellet de la célula con un tampón PBS precalentado durante 1 a 2 veces, y la centrifugadora de la misma manera descarta el sobrenadante y guarde la pellet de la celda.

1.3. Para células de tejido: corte el tejido en pequeñas piezas tanto como sea posible, seleccione Tripsina, colagenasa y otras enzimas digestivas para digerir las piezas de tejido de acuerdo con la fuente del tejido, y filtre con una pantalla de malla 100-300 para obtener una sola célula suspensión; Después de filtrar la suspensión de la celda a un tubo de centrífuga, centrifugar a 1000 g durante 3-5 min, deseche el sobrenadante y guarde la pellet de celda; Luego, enjuague la pelota de células con un tampón PBS precalentado durante 1-2 veces, centrifugar y descartar el sobrenadante de la misma manera. Pellets celulares.

2. Fijación de la muestra de celda

2.1. Agregue 1 ml de 75% de etanol pre-enfriado en hielo a las muestras de pellets de células recolectadas, y golpee suavemente las células para que los haga un contacto completamente;

2.2. Fije las células a 4 ℃ durante 30 minutos o más (generalmente la fijación para 2 h o más puede garantizar el efecto de tinción, y la fijación para 12-24 h puede ser más efectiva, lo que puede mejorar el efecto de tinción).

2.3. Después de fijar durante un cierto período de tiempo, centrifuga las células a 1000 g durante 3-5 min, retire el fijador de etanol y retenga el sedimento de células;

2.4. Toque la parte inferior del tubo de centrífuga para dispersar las células, resuspender y lavar las células en tampón PBS, centrifugar a 1000 g durante 3-5 min, desecha el sobrenadante para recoger el sedimento de células;

3. Preparación y teñido del fluido de trabajo de teñido.

3.1. Prepare la solución de trabajo de teñido de acuerdo con la siguiente tabla y evite la luz. La cantidad de preparación se puede aumentar o disminuir en la misma proporción de acuerdo con los requisitos de uso (la solución de trabajo de teñido terminado se puede almacenar a 4 ° C en poco tiempo, úselo dentro del mismo día);


1pc muestra

Muestras 5pcs

10pcs muestras

Tampón de tinción

480 μl

2.4 ml

4,8 ml

Solución de tinción PI (50 ×)

10 μl

50 μl

100 μl

Reactivo de RNASEA (50 ×)

10 μl

50 μl

100 μl

Capacidad total

500 μl

2.5 ml

5 ml

3.2. Toque la parte inferior del tubo de centrífuga para dispersar las células precipitadas en el paso 2.4, y luego agregue 500 μl de la solución de trabajo de tinción preparada, pipeteo suavemente para dispersar las células y mezclarse con la solución de trabajo de tinción;

3.3. Incube a 37 ° C durante 30 minutos en la oscuridad, y luego use citometría de flujo para detección.

4. Detección y análisis de flujo.

Se usó un citómetro de flujo para detectar la fluorescencia roja en la longitud de onda de excitación de 488 nm, al tiempo que detecta la dispersión de la luz. Use el software de análisis apropiado para el análisis de contenido de ADN celular y análisis de dispersión de luz.

Notas:

1. Los tintes fluorescentes tienen problemas de apagado de fluorescencia, por lo que intenta evitar la luz durante el uso y el almacenamiento;

2. Antes del experimento, se recomienda sincronizar el ciclo celular para evitar la gran diferencia repetitiva causada por el ciclo celular diferente;

3. La densidad de plantación de células experimentales no debe ser demasiado alta o demasiado baja para evitar la inhibición del contacto o la dependencia de la densidad; 4. Al manejar la solución de tinción PI, preste atención a la protección y evite el contacto directo con el cuerpo humano o la inhalación;

5. Por favor, use la capa de laboratorio y los guantes desechables durante la operación.

¡El producto es solo para fines de investigación científica, no para el diagnóstico clínico!

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