TELÉFONO

+86 (027) 5111 3188

categoria de producto

Kit de detección de viabilidad de la caída de Calcein AM (CCK-F)

Compartir con:

Volumen: 100t

Estado de Disponibilidad:
  • G1609-100T
  • Servicebio

Descripción del producto

Información del Producto

nombre del producto

Gato. No.

Especificaciones.

Kit de detección de viabilidad de la caída de Calcein AM (CCK-F)

G1609-100T

100T

G1609-500t

500t

Calcein AM se basa en Calcein (Calcein), introduciendo un grupo de acetometoximetilo (AM). El grupo AM no solo enmascara la parte molecular del calcio quelante de calceína, sino que también mejora su hidrofobicidad, por lo que puede permitir que Calcein AM penetre fácilmente la membrana de las células vivas y se escindan en calceína por la esterasa endógena de la célula. Calcein que ha perdido el grupo AM no puede pasar fácilmente a través de la membrana celular y, por lo tanto, se retiene en la célula; Además, la parte de la molécula quelante de calcio está expuesta, lo que permite que la sonda de calceína se uniera a los iones de calcio en las células vivas y emite fluorescencia verde fuerte. La falta de esterasa en las células muertas no permite que Calcein AM se hidroliza en Calcein, por lo que las células muertas no pueden ser etiquetadas. Calcein AM tiene baja citotoxicidad y tiene poco efecto sobre las funciones celulares, como la proliferación celular o la quimiotaxis de los linfocitos. Es una sonda fluorescente muy adecuada para tinca con células vivas.

Este producto de detección de viabilidad de la célula de Calcein AM también se denomina kit de conteo de fluorescencia celular (CCK-F), que utiliza la sonda fluorescente de calcein am para etiquetar las células vivas para evaluar la viabilidad, la toxicidad y la proliferación de células. Kit de detección. Después de la optimización y la depuración, este kit no solo tiene una alta sensibilidad de detección y un amplio rango lineal, sino que también solo necesita un corto tiempo de incubación para completar la detección de células. La operación es simple, no requiere etiquetado de radioisótopos, y no requiere pasos como la disolución de cristal, lo que puede reducir los errores causados ​​por las operaciones experimentales y mejorar la precisión y la repetibilidad.

Almacenamiento y transporte.

Bolso de hielo (hielo húmedo) Transporte;

Almacenar a -20 ° C. La solución de calcein am debe almacenarse en la oscuridad, y debe evitarse la congelación y la descongelación repetidas tanto como sea posible; Es válido por 12 meses.

Lista de productos:

Gato. No.

Descripción del Producto

Volumen

G5051-100ml

Dimetilsulfóxido DMSO GRADO BIOquímico

100ml

Almacenamiento y transporte.

Almacenamiento y transporte a temperatura ambiente, válidos por 2 años.

Componente

Número de componentes

Componente

G1609-100T

G1609-500t

G1609-1

Solución de Calcein am

10 μl

50 μl

G1609-2

Tampón de detección CCK-FD

10 ml

50 ml

Manual

1

Pasos de operación:

1. Preparación de la solución de trabajo de detección de calcein am:

De acuerdo con la cantidad de uso de 100 μl por pocillo de la placa de 96 pocillos, consulte la siguiente tabla, mezcle la solución de calcein am y el búfer de detección de CCK-F en proporción para preparar la solución de trabajo de detección de calcein am.

Componente

10Muestras de PCS

50Muestras de PCS

100Muestras de PCS

Solución de Calcein am

1 μl

5 μl

10 μl

Tampón de detección CCK-F

1 ml

5 ml

10 ml

2. Detección de células adherentes:

Los siguientes pasos corresponden principalmente al esquema de detección de placas de 96 pocillos, y otros sistemas de placa de pozo deben ajustarse de acuerdo con la situación.

un. Placa de siembra de células: semilla uniformemente las células en una placa de 96 pocillos a una determinada densidad, y aplique fármacos u otros pre-tratamientos (la densidad de la siembra se determina por factores como el tamaño celular, la tasa de crecimiento, etc.);

B. (Opcional) Lavado de células: Aspire el medio de cultivo original y se lava 1-2 veces con tampón PBS (G4202 recomendado) para reducir la interferencia de suero, fenol rojo o medicamentos en los resultados experimentales;

C. Etiquetado de la sonda: Después de eliminar el medio de cultivo celular o el tampón PBS, agregue 100 μl de solución de trabajo de detección de calcein am, e incube a 37 ° C en la oscuridad durante 30 min;

un. (Opcional) Incubación de células: cambie el medio de cultivo celular y continúe incubando durante 15-30 minutos para garantizar que la calcein am en las células esté completamente hidrolizada;

B. Detección de fluorescencia: use un lector de microplacas para la lectura de fluorescencia, la longitud de onda de excitación máxima de la sonda de calcein am es de 501 nm, y la longitud de onda de emisión máxima es de 521 nm. La actividad celular es directamente proporcional a la intensidad de la fluorescencia. Según diferentes propósitos experimentales, los núcleos celulares pueden ser más contrarios o detectados por otros instrumentos (como el microscopio de fluorescencia).

1. Detección de células de suspensión:

un. Siembra de células: células de semilla uniformemente en una placa de 24 pocillos a una cierta densidad, y aplique drogas u otros pre-tratamientos (la densidad de la siembra se determina por factores tales como el tamaño celular, la velocidad de crecimiento, etc.);

B. (Opcional) Lavado de células: Centrifugue a 1000 g durante 3-5 minutos para eliminar el medio original, y lavar 1-2 veces con un tampón PBS, cada vez que necesite una centrifugación de 1000 g durante 3-5 min para reducir el suero, el rojo fenol o Interferencia de drogas con resultados experimentales;

C. Etiquetado de la sonda: después de la centrifugación a 1000 g durante 3-5 minutos, retire el medio de cultivo celular o el tampón PBS, agregue una cantidad apropiada de solución de trabajo de detección de calcein am, e incube durante 30 minutos a 37 ° C en la oscuridad;

D. (Opcional) Incubación de células: cambie el medio de cultivo celular y continúe incubando durante 15-30 minutos para asegurarse de que la calcein am en las células esté completamente hidrolizada;

mi. Detección de fluorescencia: use un lector de microplacas o citómetro de flujo para detección de fluorescencia. La longitud de onda de excitación máxima de la sonda de calcein am es de 501 nm, y la longitud de onda máxima de emisión es de 521 nm. La actividad celular es directamente proporcional a la intensidad de la fluorescencia. Según diferentes propósitos experimentales, los núcleos celulares pueden ser más contrarios o detectados con otros instrumentos (como el microscopio de fluorescencia).

Notas:

1. La solución de Calcein am se centrifuga por un corto tiempo antes de usarlo para reducir la pérdida de reactivos.

2. Evite la congelación repetida y la descongelación de la solución de Calcein am. Después de recibir el producto, se recomienda alícuarse adecuadamente y almacenarlo en un recipiente sellado a -20 ° C en la oscuridad.

3. Calcein AM es inestable en solución acuosa. La solución de trabajo de detección de Calcein AM debe prepararse para su uso inmediato, y será efectivo dentro de las 24 horas.

4. Debido a diferentes estados celulares, el tiempo de incubación y la concentración de la solución de trabajo de detección de calcein am se pueden ajustar de acuerdo con la situación.

5. Cuando se utiliza un lector de microplacas para medir la intensidad de la fluorescencia, use una placa de cultivo de células negras.

6. Los tintes fluorescentes tienen problemas de apagado. Por favor, opere y guárdelos de la luz.

7. Para su salud y seguridad, utilice capas de laboratorio y guantes durante la operación.

¡Este producto es solo para fines de investigación científica, no para el diagnóstico clínico!

descargarimgRebanada 13Rebanada 12Rebanada 10Rebanada 14

Contact us

enlaces rápidos

categoria de producto

Ponerse en contacto

 5º Piso, 22 Edificio, Biopark, Gaoxin 2ª Road No. 388, Zona de Desarrollo de Alta Tecnología del Lago East, Wuhan, Hubei, China 430079
 +86 (027) 5111 3188
Copyright © 2021 Wuhan ServiceBIO Technology Co., Ltd.