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Kit de inmunohistoquímica con anticuerpo secundario anti-ratón Kit de inmunohistoquímica de dos pasos

Estado de Disponibilidad:
  • G1216-200t
  • Servicebio

Descripción del producto

Introducción del producto


Este kit es un kit de inmunohistoquímica de dos etapas de alta sensibilidad, adecuado para el desarrollo del color posterior de los anticuerpos cuyos anticuerpos primarios se derivan de los ratones. El kit contiene IgG anti-ratón conjugado con conjugado de HRP de PEROXIDASA HRP HRP. Este producto es adecuado para anticuerpos primarios derivados del mouse. En los experimentos de IHC y Western Blot, los anticuerpos secundarios anti-ratones marcados con HRP se combinan con el anticuerpo primario derivado del mouse (los reaccionos con el antígeno primero) se combinan y luego reaccionan con DAB. DAB es un sustrato de peroxidasa de rábano picante (HRP). Bajo la catálisis de HRP, DAB produce precipitados marrones para lograr la amplificación de la señal y el desarrollo del color.


Almacenamiento y transporte.


Transporte en hielo mojado; almacene el anticuerpo secundario a -20 ° C, y almacene la dilución de DAB y una solución de stock DAB 50 × a 4 ° C; El período de validez es de 12 meses.


Listo para trabajar


1. Traiga su propio PBS (recomendado G4202, G0002), reactivos de contabilidad nuclear (solución de tinción de hematoxilina recomendada G1004, solución de diferenciación de hematoxilina G1039, solución azul que regresa de hematoxilina G1040), alcohol degradado, xileno, tabletas de montaje, etc.


2. Prepare la solución de trabajo del anticuerpo secundario: diluya el anticuerpo secundario anti-ratón de cabra marcado con HRP con PBST (pH 7.2-7.4) en una proporción de 1: 200 para obtener la solución de trabajo del anticuerpo secundario. Preparado para uso inmediato, use dentro de las 48 horas.


3. Prepare la solución de trabajo de desarrollo de color DAB: agregue 20 μl de solución madre de 50 × DAB a cada 1 ml de diluyente DAB, mezcle bien para su uso posterior. Preparado a pedido, listo para su uso ahora.




Pasos


1. De acuerdo con los procedimientos inmunohistoquímicos de rutina, las secciones de tejido son predefinizadas, recuperación de antígenos, bloqueadas e incubadas con el anticuerpo primario, y luego se lavan tres veces con PBS durante 5 minutos cada uno.


2. Incubación de anticuerpos secundarios: agregue 50-100 μl de la solución de trabajo de anticuerpos secundaria a cada rebanada para cubrir completamente el tejido, y la incubación a temperatura ambiente durante 30-60 min. Lave tres veces con PBS durante 5 minutos cada vez.


3. Desarrollo de color DAB: agregue una solución de trabajo DAB de 50-100 μl de gota a gota a cada rebanada, incube durante varios minutos a temperatura ambiente, observe bajo un microscopio para controlar el desarrollo del color al efecto esperado, y luego lavar inmediatamente con agua para detener la Desarrollo de color.


4. (Opcional) Destenerse de los núcleos celulares: las secciones se manchan con una solución de tinción de hematoxilina durante 3-5 min, y luego se lava con agua del grifo; después de la rápida diferenciación con solución de diferenciación de hematoxilina durante 3-5 s, luego se lava con agua del grifo; Lavado con agua del grifo o devuelto a azul con solución de hematoxilina 3-5 s.


5. Montaje: las rodajas están deshidratadas por el alcohol degradado de acuerdo con los pasos habituales, el xileno es transparente, y las diapositivas están montadas con goma neutra.




Precauciones


1. Si el fondo es demasiado oscuro durante el desarrollo de color inmunohistoquímico, considere extender el tiempo de lavado, use una solución de bloqueo adecuada para bloquear, inactivar la catalasa endógena, acortar el tiempo de desarrollo de color y reducir la concentración del anticuerpo secundario. Si no hay desarrollo de color o el desarrollo de color es demasiado ligero, puede aumentar adecuadamente la concentración del anticuerpo primario y el anticuerpo secundario para extender el tiempo de desarrollo del color y luego verifique si el anticuerpo secundario se desarrolla normalmente.


2. DAB es perjudicial para el cuerpo humano, tenga cuidado al manejarlo y cuídase para evitar el contacto directo con el cuerpo humano o la inhalación del cuerpo.

G1216-200t

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