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Kit de tinción de β-galactosidasa de celda de envejecimiento G1073-100T

ESPECIPCIÓN:100 t
Uso del producto:Tinción de células de tejido sensoncentista o células senescentes.
Almacenamiento y transporte:

El polvo X-Gal se disolvió con DMF de 5 ml en el kit, dividido en 1 ml / tubo, y se almacenó a -20De una manera oscura de evitar la congelación repetida. Después de que se preparó la solución, la vida útil de X-Gal fue de 3 meses. Si continúa usándose más allá de la fecha de vencimiento, puede afectar los resultados experimentales.

El kit es válido por un año.

T:
Estado de Disponibilidad:
  • G1073-100T
  • Servicebio

Descripción del producto


Descripción del producto

La mayoría de las células normales tienen una capacidad limitada de dividir, y cuando no pueden dividir, se convierten en senescentes. Las células sensentes suelen ser más grandes y tienen una alta expresión de β-galactosidasa, y la mayor actividad de la β-galactosidasa se puede detectar en PH6.0. El kit es Sobre la base de este principio, con el objetivo de que el envejecimiento relacionado con la regulación de la actividad de la β-galactoidasa. microscopio.

Uso del producto
nombre del producto

Código

Especificidad

Solución de fijación de tinción β-galactosidasa

G1073-1

100 ml

Solución de tinción β-galactosidasa A

G1073-2

100 ml

β-galactosidasa mancha b

G1073-3

1.25 ml

Dmf

G1073-4

5 ml

X-gal

G1073-5

100 mg, polvo, 1 tubo


Uso:


1. Preparación de reengo.

(1) Preparación de su propia solución de tampón PBS.

(2) El polvo de X-Gal 100 mg se disolvió completamente y se mezcló con un DMF de 5 ml para obtener una solución X-Gal, que luego se dividió en tubos de 1,5 ml de centrífuga con 1 ml para cada tubo y se almacenó a -20.

(3) La solución de teñido se preparó en las proporciones que se muestran en la tabla a continuación:


Solución de tinción β-galactosidasa A

940 μl

β-galactosidasa mancha b

10 μl

Solución X - Gal

50 μl


2. Paso de tinción

(1) Para celdas adherentes.

a) Las células cultivadas en placas de 6 pocillos (o diapositivas celulares) se succionaron del medio de cultivo celular, se lavaron dos veces con PBS, luego se añadió una solución de fijación de tinción β-galactosidasa de 1 ml y se fijó a temperatura ambiente durante 15 minutos.

b) la solución fija se descartó y las células se lavaron con PBS durante 3 veces, 2min cada una

c) PBS fue absorbida en la medida de lo posible, se añadió 1 ml de solución de tinción a cada pocillo y se incubó a 37ºC durante 2 h hasta 2 h hasta la noche. Nota: no se incube en 37 ℃ incubadora de dióxido de carbono. El desarrollo del color debe ser observado en el tiempo. Si la expresión de β-galactosidasa en la muestra es alta, la tinción se puede completar en unas pocas horas. Si la expresión de la enzima β-galactosido es baja, el tiempo de incubación debe extenderse adecuadamente, durante el cual la placa de 6 pocillos debe Sellado con envoltura de plástico o parafilm para evitar la evaporación del líquido.

d) Observación en microscopio de luz ordinario. Si no es posible observar y contar con el tiempo, se puede eliminar el fluido de trabajo, las células se pueden lavar con PBS, y luego se pueden agregar y almacenar 2 ml PBS durante 1 semana a las 4. ℃, después de eliminar el líquido de la tinción, agregue un 70% de glicerina para cubrir las células, y las células se pueden almacenar durante mucho tiempo a 4 ℃. Si es un deslizamiento celular, se puede deshidratarse por etanol degradado y luego gotear Tableta sellada hecha en una rebanada permanente para la preservación.

(2) para la sección congelada

a) Las secciones congeladas se equilibraron a temperatura ambiente durante 10 minutos. Circle el tejido con un accidente cerebrovascular.

b) Se añadió una cantidad apropiada de solución de fijación de tinción β-galactosidasa al tejido para cubrir completamente el tejido y fijado a temperatura ambiente durante 20 minutos.

c) Las secciones de tejido se empaparon y se lavaron por PBS durante 3 veces, 5min cada una.

d) la sección se coloca en una caja húmeda a prueba de luz, y se agrega una cantidad adecuada de solución de tinción al tejido para cubrir completamente el tejido. La caja húmeda se incubó a 37 ℃, y se observó la representación de color bajo el microscopio. cada 2h. Si no se observó una representación de color, se continuó la incubación hasta que las células seniles mostraron color en el tejido. Si la muestra se incubará durante la noche, se debe agregar una cantidad suficiente de la solución de teñido para evitar que el líquido se evapore.

e) Después de que se desarrolle el color del tejido, se eliminó la solución de tinción, y las secciones se empaparon en PBS durante dos veces y se empaparon en agua pura durante dos veces

f) Se agregaron gotas de tinte rojo sólido nuclear durante 3 minutos y se lavaron durante 3 veces. Esta etapa no se requiere. Si el núcleo debe estar manchado, podemos usar nuestro tinte rojo de fijación nuclear (G1035).

g) deshidratar con etanol anhidro durante 2 veces, 5min cada uno, xileno transparente durante 5min, y luego gota goma neutra para sellar la pieza.



Resultado de la tinción:

Las células senescentes son azules.


Leyenda:

图片 1

Fig.1 Las células WI-38 se tiñeron con un kit de β-galactosido. La figura de la izquierda muestra las células WI-38 senescentes sin la capacidad de la división y la proliferación, pero sigue vivo. Las células de tinción positivas después de la tinción son más del 95%. La imagen de la derecha muestra células WI-38 recién resucitadas con menos de 3 pases (paso temprano) y sin células significativamente positivas después de la tinción.



Notas

1. La solución de fijación de tinción β-galactosidasa es tóxica y corrosiva, por lo que por favor preste atención a la protección durante la operación.

2. La solución X-Gal debe descongelarse completamente a temperatura ambiente y mezclarse antes de usarla. La solución de tinción A y B debe restaurarse a temperatura ambiente antes del uso. La solución de trabajo de teñido preparada debe mezclarse completamente sin precipitación.

3. La reacción de tinción de β-galactosidasa de las células senescentes depende de las condiciones específicas de pH y no se puede realizar en una incubadora de CO2

La reacción de tinción de β-galactosidasa de las células senescentes depende de las condiciones específicas de pH y no se puede realizar en una incubadora de CO2 incubar para desarrollar color, de lo contrario, afectará el pH del fluido de trabajo de teñido, lo que resultará en una falla de teñido.

4. Elija los consumibles de polipropileno o vidrio al preparar una solución de teñido

5. Tiempo de desarrollo de color 2H, durante la noche, durante el cual se debe observar el desarrollo del color varias veces, el tiempo demasiado corto puede llevar a resultados negativos; demasiado largo puede conducir a falsos positivos. El tiempo de desarrollo del color está estrechamente relacionado con la cantidad de β- Galactosidasa contenida en la muestra en sí.

6. La tinción β-galactosidasa de las secciones de tejido requiere una mayor preparación de muestras. Las muestras deben almacenarse a -80 y el experimento debe completarse en poco tiempo tan pronto como sea posible. Porque β-galactosidasa es muy fácil de inactivar, el almacenamiento inadecuado de la muestra o demasiado tiempo puede provocar la inactivación de la enzima , la tinción no es positiva.

7. Antes de preparar la solución de teñido, debe revisarse el valor de pH de la solución de teñido a. Si no es 6.0 (el pH puede cambiar debido a las condiciones de conservación), se debe usar HCl o NaOH para ajustar el pH a 6.0 antes de usarlo.


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Todos nuestros productos serán embalados en cartón estándar.

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