Ligasa de ADN termosensible de fosfatasa alcalina para la clonación molecular

G3400-1000U

Introducción

La fosfatasa alcalina (termosensible) producida por nuestra empresa es una fosfatasa alcalina termal inestable derivada de microorganismos antárticos (TAB5) y se expresa de forma recombinante por E. coli. No puede catalizar específicamente la eliminación de ADN, ARN, DNTP y RNTP. 5'o 3'grupo de fosfato de 3'Terminal. La fosfatasa alcalina se usa ampliamente en la biología molecular, como la eliminación de los extremos fosforilados de ADN y ARN para uso posterior en la clonación de la sonda o el etiquetado final; En experimentos de clonación molecular, la desfosforilación puede prevenir la auto-ligadura del ADN plasmídico linealizado; También se puede utilizar para degradar las DNTP sin unir en las reacciones de PCR para la posterior secuenciación o el análisis SNP.

Características: Desfosforilación rápida; inestable para calentar, completamente inactivado al incubarse a 80 ° C durante 2 min.

Fuente: Escultura Escherichia coli que lleva el gen de la fosfatasa alcalina de la TAB5; Su peso molecular de su monómero es de aproximadamente 35 kDA;

Definición de actividad enzimática: la cantidad de enzima requerida para la desfosforilato de 1 μg de vector de PUC19 linealizado al incubar a 37 ° C durante 30 minutos se define como una unidad de actividad enzimática. La desfosforilación se define como la tasa de inhibición de la reacción de autoligación del vector superior al 95% (medido por la transformación de E. coli).

Inactivación o inhibición: el calentamiento a 80 ° C durante 2 minutos puede inactivar completamente la fosfatasa alcalina. EDTA y otros agentes quelantes de iones metálicos tienen efecto inhibitorio en la fosfatasa alcalina

Pureza y concentración: pureza de detección SDS-PAGE ≥95%, 5 U / μL.

Amortiguador de almacenamiento enzimático:10 mm Tris-HCl, 1 mm MgCl₂, 0.01 mm ZNCL₂, 50% glicerol, pH 7.4.

Tampón de almacenamiento enzimático: TRIS-HCl 10 mM, MMCL de 1 mm₂, 0.01 mm ZNCL₂, 50% glicerol, pH 7.4.

10 × alp Reacción Buffer:500 mm bis-tris-hcl, MGCL de 10 mm₂, 1 mm zncl₂, PH 6.0.

Almacenamiento y transporte.

Transporte con hielo mojado; Almacenamiento a -20 ° C, válido por 12 meses.