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Mycoplasma Detección Kit Método PCR para cultivo celular

Especificación: 50t
Estado de Disponibilidad:
  • G1900-50T
  • Servicebio
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Descripción del producto

G1900-50T

Introducción:

La contaminación de MyCoplasma puede causar efectos adversos en todos los aspectos de las células, y se ha convertido en un problema altamente valorado en el cultivo celular. Por lo tanto, es muy necesario realizar pruebas regulares de contaminación de micoplasma. Este kit de prueba de MyCoplasma adopta el método de PCR para detectar específicamente la contaminación de micoplasma en diversos materiales biológicos de células cultivadas (como el cultivo celular, las secreciones animales de laboratorio, el suero animal, etc.). Los cebadores mixtos utilizados en el kit son cebadores específicos diseñados para las regiones conservadas de la secuencia de RRNA de MyCoplasma 16S. El líquido de cultivo celular se puede usar directamente como una plantilla de PCR para amplificar específicamente el ADN de micoplasma con la mezcla de PCR MyCoplasma correspondiente (2 ×), todo el proceso se puede completar en 2 horas. Este kit tiene una alta sensibilidad de detección y puede detectar tan solo 20 copias de MyCoplasma.

Almacenamiento y transporte.

Bolso de hielo (hielo húmedo) Transporte; -20 ° C Preservación, válida por 12 meses.

Número de componentes

Componente

G1900-50T

G1900-1

Mycoplasma PCR Mix (2 ×)

1 ml

G1900-2

Mycoplasma Primer Mix

100 μl

G1900-3

Control positivo

50 μl

G1900-4

Mycoplasma libre de agua

1 ml

manual

1 份

Pasos

1. Preparación de la muestra: tome una cantidad apropiada del sobrenadante del cultivo celular que se analice en un tubo de PCR limpio, caliente a 95 ° C durante 5 min utilizando una máquina PCR como plantilla. Las muestras de suero se pueden diluir con agua libre de mycoplasma, y ​​se puede tomar una cantidad adecuada de la muestra en un tubo de PCR limpio y tratado térmicamente con una máquina PCR a 95 ° C durante 5 min como una plantilla;

2. Preparación del sistema PCR: Cada experimento debe configurar un control negativo (reemplazar 1 μl de la muestra a probar con la misma cantidad de agua libre de micoplasma) y un control positivo (agregue 0.5 μl del control positivo a la muestra a ser probado como una plantilla), use máscaras y guantes desechables durante el experimento, y opere con cuidado para evitar que la operación incorrecta introduce la contaminación de micoplasma exógeno;

Componente

Volumen

Modelo

1 μl

Mycoplasma Primer Mix

2 μl

Mycoplasma PCR Mix (2 ×)

10 μl

Mycoplasma libre de agua

A 20 μl

3. Configuración del programa PCR:

Paso

La temperatura

Time

Ciclos

Desnaturalización inicial

98

2 minutos

1

Desnaturalización

98

20 s

30

Recocido

56 ℃

25 s

Extensión

72

10 s

Extensión final

72

5 minutos

1

Retener

4-16 ℃

Para siempre


4. Electroforesis en gel: tome 10 μl de producto de PCR y use gel de agarosa al 1% para detección de electroforesis;

5. Análisis de resultados: cada experimento confirma la contaminación de micoplasma de la muestra al comparar los resultados de la prueba con el control negativo y el control positivo. El tamaño de la banda positiva es de unos 500 pb. Si hay una banda en el resultado de la prueba de control negativo, es muy probable que haya contaminación en el sistema PCR, y se recomienda volver a experimentar para confirmar el resultado. Si es necesario, los productos de PCR también se pueden secuenciar de forma rutinaria para determinar las especies específicas de micoplasma.

Precauciones

1. Este kit puede detectar M.orale, M.Arginini, M.BOVIS, M.Fermentans, M.Gallisepticum, M.Hominis, M.Pirum, UEPLASMA SPP, M.hyorhinis, M.Pneumoniae, A.laidlawii, etc. . Al menos 11 especies de micoplasma están contaminadas.

2. Diga a fondo y mezcle todos los reactivos en el hielo antes de usarlo, y almacene a -20 ° C después de su uso.

3. Se debe establecer un control negativo y un control positivo para cada experimento. El grupo experimental recomienda establecer un gradiente de plantilla de muestra.

4. Debe usar una máscara durante la operación y seguir estrictamente las normas operativas de la PCR para evitar que la introducción de la contaminación externa afecte los resultados experimentales.

5. Para garantizar la confiabilidad y la estabilidad de los experimentos celulares, se recomienda realizar pruebas regulares de contaminación de micoplasma.

6. Para su seguridad y salud, utilice capas de laboratorio y guantes desechables para OFICINA.V

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