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Reactivo de biología molecular líquida de extracción de ARN

Estado de Disponibilidad:
  • G3013-100ml

Descripción del producto

Introducción del producto:

Esta solución de extracción de ARN de producto es un reactivo utilizado para la extracción total de ARN de células o tejidos. Utiliza isotiocianato de guanidina y otras sustancias para que las células rápidamente lise para liberar ARN y extraerlo en fenol. Al mismo tiempo, contiene inhibidores de RNase para evitar la degradación del ARN y mantener la integridad del ARN.

Contenidos del paquete:

Gato. No.

Descripción del Producto

Volumen

G3013

Solución de extracción de ARN

100ml

Condición de almacenamiento:

Transporte de bolsa de hielo mojada; Almacenado a temperatura de 4 ℃, válida por 12 meses.

Uso:

Auto-preparado LF, alcohol isopropílico, agua DEPC, etanol 75% (preparación de agua DEPC).

1. Lisis de una muestra de células o tejidos.

Células adheridas: Retire el medio de cultivo celular, limpie las células con la cantidad apropiada de PBS previamente enfriada, y borra PBS tanto como sea posible. Agregue extracto de ARN a la placa de pozo de acuerdo con la cantidad de extracto de ARN de 1 ml por placa de 6 pistas por 6 pocillos y extracto de ARN de 0.5 ml por placa de 12 pocillos, agite suavemente para hacer que las células en la parte inferior de la placa se pongan en contacto con el extracto de ARN, Sople las células con pipeta para hacer que las celdas se lise, luego transfieran al tubo de centrífuga y deje reposar a temperatura ambiente durante 5 min.

Células suspendidas: las células se recogieron por centrifugación, y el sobrenadante se eliminó en la medida de lo posible. Se agregó un extracto de ARN de 1 ml a cada 1-10x106 células, y las células se soplaron varias veces con pipeta con escisión, luego las células se dejaron de pie a temperatura ambiente durante 5min.

Muestra de tejido: corte el tejido en trozos pequeños y colóquelos en un homogeneizador pre-enfriado. Agregue un extracto de ARN de 1 ml por cada 100 mg de tejido y homogeneice hasta que no sean piezas de tejido. Los fragmentos de tejido se separaron por centrifugación a 12000 g a 4 ℃ a 4 minutos, y el sobrenadante se transfirió a un nuevo tubo de centrífuga.

2. Extracción de ARN: se agregó 380UL LF a cada extracto de ARN de 1 ml, y luego el tubo de la centrífuga se sacudió violentamente durante 15 años por la mezcla de Eddy o al revés, y se fue a la izquierda durante 3 minutos a temperatura ambiente.

3. Centrifugación: centrifugue a 12000 g a 4 ℃ durante 15 minutos, transfiera cuidadosamente la fase acuosa incolora con cuidado al nuevo tubo de centrífuga y absorbe 500-550UL por ml de extracto.

4. ARN precipitado: el isopropanol 550UL se añadió al tubo de extracción de fase acuosa recolectada anteriormente, mezclada ligeramente hacia abajo durante varias veces, y precipitó a -20 ℃ durante 15 minutos.

5. Centrifugación: se centrifugó a 4 ℃ durante 10 minutos a 12000 g, la precipitación blanca era visible en la parte inferior del tubo, que era el ARN total, y se descartó el sobrenadante.

6. Lavado: Agregue 1 ml 75% de etanol y mezclelo al revés. Después de la centrifugación a 12000 g durante 5min a 4 ℃, el sobrenadante se descartó y luego se centrifugó brevemente a una alta velocidad (5000 g para 3-5). El líquido fue aspirado cuidadosamente con una cabeza de succión micro.

7. Dissolución de ARN: El tubo de centrífuga con precipitación de ARN se dejó abierta durante 3-5min. Después de que el ARN se secó ligeramente, se agregó 20UL DEPC, se agregó agua para que el ARN se disuelva completamente, lo que podría usarse para la detección de concentración y los experimentos de seguimiento. Tenga cuidado de no secar demasiado el ARN, de lo contrario será difícil de disolver y afectará la proporción A260 / 280.

Notas:

1. Todas las puntas de la pipeta y los tubos de centrífuga deben estar libres de contaminación de RNasa. Puede comprar consumibles de enzimas estériles de nuestra empresa.

2. Este reactivo contiene isotiocianato de guanidina y fenol. Evite el contacto con la piel o la inhalación.

3. Por favor, use ropa de laboratorio y guantes desechables.

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