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Reactivo de transfección PEI 40K para el reactivo de transfección de biología celular

Especificación: 10ml
Estado de Disponibilidad:
  • G1802-10ml
  • Servicebio
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Descripción del producto

G1802-10ml

Introducción:
El reactivo de transfección PEI 40K (reactivo de transfección de polietilenimina linealizada) es un polímero catiónico de carga alto que tiene una polietilenimina lineal como un cuerpo principal con un peso molecular de 40000, que los cinturones cargados positivamente, y pueden combinarse efectivamente con el ácido nucleico negativo, forma una Complejo, y se introduce en la célula. El reactivo de transfección de polietileno linealizado (PEI 40K) es baja tóxica, alta eficiencia de transfección y bajo costo, es un reactivo de transfección instantáneo celular muy popular. El reactivo de transfección Linear PEI Lineal PEI 40K se usa ampliamente en una variedad de líneas celulares, incluyendo HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH / 3T3, SF9, HEPG2 y celulas HELA, etc., etc. Eficiencia de transfección de hasta 80% ~ 90%.

Almacenamiento y transporte.

Bolso de hielo (hielo húmedo) Transporte; Preservación 4 ° C, válida por 6 meses.

Pasos

1. Preparaciones Antes de la transfección de células adherentes (placa de 6 pocillos como ejemplo, consulte la tabla adjunta para otras especificaciones):

a) El día antes de la transfección, planta las células uniformemente en la placa de pozo a una densidad adecuada, y es recomendable que las células converjan convergentes al 70-85% durante la transfección formal;

b) Antes de la transfección, retire el medio de cultivo de células originales, lávelo 1-2 veces con PBS, y reemplace 1,8 ml de medio de suero o bajo en suero (menos del 5%), o OPTI-MEM; Las células diferentes son el sexo dependiente del suero es diferente, ajustado de acuerdo con los tipos de células específicas.

c) Coloque las celdas reemplazadas en la incubadora y comience a preparar el complejo de transfección.

2. Preparaciones Antes de la transfección de las células de suspensión:

a) En el día de la transfección, centrifugar la cantidad apropiada de células para eliminar el medio, y resuspenderlas en un medio básico sin suero o bajo en suero (menos del 5%);

b) Coloque las células de suspensión preparadas en la incubadora y comience a preparar el complejo de transfección. La relación volumen entre el complejo de transfección y el medio de cultivo se puede ajustar con referencia a la relación a la relación de las células adherentes.

3. Preparación del complejo de transfección:

a) Prepare la solución A: 100 μl de medio basal sin suero y 2 μg de ADN de plásmido, mezcle bien por pipeteo;

b) Prepare la solución B: 100 μl de medio basal sin suero y 6-8 μl de reactivo de transfección PEI 40 K, mezcle bien soplando y aspiración;

c) Agregar solución B a la solución A, mezcle suavemente por pipeteo e incube a temperatura ambiente durante 15 minutos para formar un complejo de transfección de ADN-PEI.

4. Células transfectadas:

a) Agregue el complejo de transfección obtenido en la etapa anterior dibujando una cruz o un círculo a la placa de pozo que se reemplazó previamente;

b) Mantenga presionada la placa de pozo y dibuje un \"8 \ 8 \" en la superficie plana o agite suavemente la placa de cultivo de otras maneras para que se mezcle completamente, y incube en una incubadora de 37 ° C, 5% de CO2;

c) El complejo de transfección de ADN-PEI se incuba con las celdas durante 4 a 6 horas para tener una mejor eficiencia de transfección. La incubación prolongada o durante la noche tendrá una mejor eficiencia de transfección.

Precauciones

1. Por favor, use células sanas en buenas condiciones. Se recomienda que las células recuperadas se pasen al menos 2 veces antes de la transfección.

2. Por favor, use plásmidos libres de alta calidad y endotoxinas.

3. Niveles de suero altos durante la transfección y el uso de antibióticos puede afectar la eficiencia de la transfección y el estado de la célula.

4. La tolerancia y sensibilidad de diferentes células son diferentes. La longitud del tiempo de incubación de transfección y la relación de uso PEI / ADN se pueden ajustar de acuerdo con la situación.

5. Este producto solo se utiliza para la investigación científica, no para los humanos.

6. Por favor, use abrigos de laboratorio y guantes desechables durante la operación.

Tabla adjunta: Uso de la transfección de diferentes recipientes de cultivo celular (solo para referencia)

Recipiente de cultura

Area de crecimiento

(Cm2)

Número de células inoculadas.

Cantidad de ADN

(ugramo)

Pei

(Μl)

Volumen complejo de transfección(Μl)

capacidad total

(Ml)

Placa 96well

0.3

(2-4) × 104

0.1

0.3-0.4

10

0.1

Placa 24well

1.9

(1.2-2.4) × 105

0.5-1

1.5-4

50

0.5

Placa 12well

3.8

(2.4-4.8) × 105

1-2

3-8

100

1

Placa 6well

9.5

(6-10) × 105

2-4

6-16

200

2

10 cmpetri plato

55

(4-6) × 106

12-24

36-96

1000

12

Matraz t75culture

75

(6-10) × 106

18-36

54-144

1000

15

¡Este producto es solo para fines de investigación científica, no para el diagnóstico clínico!

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