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Swescript RT I Kit de Synthesis de ADNc First Strand

Estado de Disponibilidad:
  • G3330-50

Descripción del producto

Introducción del producto:

Este producto utiliza la transcriptasa inversa mutada modificada para sintetizar la primera hebra de ADNc con ARN total o ARNm como plantilla para la transcripción inversa eficiente. El kit contiene todos los reactivos necesarios para sintetizar la primera cadena de ADNc con alta calidad, y proporciona dos tipos de cebadores de síntesis de ADNc para la opción: El cebador aleatorio HEXAMER PRIMER y OLIGO (DT) 18 Primer Sintetizan los productos de ADNc que pueden ser directamente Se utiliza para reacciones posteriores de PCR o QPCR. Swescript RT I (Transcriptasa inversa) es una transcriptasa transcriptasa inversa mutante basada en M-MLV transcriptasa inversa y obtenida a través de la detección evolutiva in vitro. Swescript RT no tengo actividad RNASE H. La degradación de ARN en la plantilla de la hibridación de ADN / ARN durante la primera reacción de síntesis de cDNA de cadena se evitó, a fin de garantizar la cantidad y la longitud de la primera síntesis de ADNc de cadena. En comparación con la enzima de tipo salvaje, la estabilidad térmica y la eficiencia de síntesis de Swescript RT I se mejoran significativamente, y el ADNc se puede sintetizar de manera eficiente en el rango de 42-55 ℃, así como el ADNN hasta 10kb.

Contenidos del paquete:

Gato. No.

Descripción del Producto

Volumen

G3330

Swescript RT I Kit de Synthesis de ADNc First Strand

50RXNS / 100RXNS

Componentes:

Número de componentes

Componente

G3330-50

G3330-100

G3330-1

Swescript rt i enzyme mezclaa

50UL

100UL

G3330-2

5 × tampón de reacciónb

200UL

400UL

G3330-3

Oligo (DT) 18 Primer (100um)

50UL

100UL

G3330-4

Primer de hexamer aleatorio (100um)

50UL

100UL

G3330-5

Agua libre de nucleases

1 ml

1 ml

Manual

1 PC

1 PC

a: Con inhibidor de RNase

b: Con mezcla DNTP y MG² +

Condición de almacenamiento:

Transporte de bolsa de hielo mojada; Almacenado a -20 Temperatura, válida por 12 meses.

Uso:

El primer paso para la síntesis de ADNc.

1. Preparación del sistema de reacción de transcripción inversa (Sistema de reacción recomendado de 20UL)

Componente

Volumen

5 × tampón de reacción

4ul

Oligo (DT) 18 Primer (100um)

1UL

o imprimación de hexamer aleatorio (100um)

o 1ul

o imprimación específica del gen (2um)

o 1ul

Swescript rt i enzyme mezcla

1UL

ARN total / ARNm *

0.1 ng-5/10 pg-0.5UG

Agua libre de nucleases

Añadir a 20UL

Nota: Para altas plantillas GC o complejas, la plantilla de ARN, los cebadores de transcripción inversa y el agua sin nucleasa se pueden mezclar por adelantado y luego se enfríen en hielo rápidamente después de mantenerse a 65 ℃ durante 5 min. Y luego agregas los otros componentes de reacción.

2. mezclar suavemente y centrifugar;

3. Configuración del programa de transcripción inversa:

La temperatura

Time

25 ℃a

5 minutos

50 ℃b

15-30 min

85 ℃

5 s

R: Por ejemplo, el cebador de hexamer aleatorio se selecciona y se incuba a 25 ℃ durante 5 minutos, luego se lleva a cabo la reacción posterior. Si elige usar el imprimador de Oligo (DT) 18 Primer o Gene, puede realizar una reacción directa a 50 ℃;

B: Para altas plantillas GC o complejas, la temperatura de transcripción inversa se puede elevar a 55.

Notas:

1. Por favor, use guantes desechables durante la operación para evitar la contaminación de RNase.

2. Los productos de transcripción inversa se pueden almacenar a -20 ℃ por un corto tiempo. Si se necesita almacenamiento a largo plazo, se recomienda almacenarlos a -80 después de empaquetar para evitar ciclos de congelación repetidos.

3. Si la plantilla es de origen eucariótico, se recomienda seleccionar oligo (DT) 18 cebador y emparejarlo con la cola de poli a 3 'de ARNm eucariótica para obtener el mayor rendimiento del ADNc de longitud completa.

4. Para la transcripción inversa del ARN procariótico, se debe usar el cebador de hexam más aleatorio o el cebador específico del gen.

5. El cebador de hexamer aleatorio tiene una amplia aplicabilidad y es adecuada para el ARNm, la RRNA, el ARNT, las plantillas de ARN pequeñas y LNCRNA.

6. Si la transcripción inversa, se le sigue el ensayo QPCR, el imprimador Oligo (DT) 18 cebador y el cebador de hexamer aleatorio se pueden mezclar para hacer que la eficiencia de síntesis de ADNc en todas las regiones del ARNm sea el mismo, lo que ayuda a mejorar la autenticidad y la repetibilidad de los resultados cuantitativos.

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