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Swescript RT I Kit de sinténtesis de cdNA First Strand (con removedor de GDNA)

Estado de Disponibilidad:
  • G3331-50

Descripción del producto

Introducción del producto:

Este producto utiliza la transcriptasa inversa mutada modificada para sintetizar la primera hebra de ADNc con ARN total o ARNm como plantilla para la transcripción inversa eficiente. El kit contiene todos los reactivos necesarios para sintetizar la primera cadena de ADNc con alta calidad, y proporciona dos tipos de cebadores de síntesis de ADNc para la opción: El cebador aleatorio HEXAMER PRIMER y OLIGO (DT) 18 Primer Sintetizan los productos de ADNc que pueden ser directamente Se utiliza para reacciones posteriores de PCR o QPCR. Swescript RT I (Transcriptasa inversa) es una transcriptasa transcriptasa inversa mutante basada en M-MLV transcriptasa inversa y obtenida a través de la detección evolutiva in vitro. Swescript RT no tengo actividad RNASE H. La degradación de ARN en la plantilla de la hibridación de ADN / ARN durante la primera reacción de síntesis de cDNA de cadena se evitó, a fin de garantizar la cantidad y la longitud de la primera síntesis de ADNc de cadena. En comparación con la enzima de tipo salvaje, la estabilidad térmica y la eficiencia de síntesis de Swescript RT I se mejoran significativamente, y el ADNc se puede sintetizar de manera eficiente en el rango de 42-55 ℃, así como el cDNA hasta 10 KB.

El kit también proporciona reactivo de removedor de GDNA, que puede eliminar rápidamente la contaminación del ADN genómico residual de las plantillas de ARN antes de los pasos de transcripción inversa, mejorar la confiabilidad de los resultados experimentales y simplificar el diseño de los cebadores QPCR sin la necesidad de un diseño de cebador cruzado.

Contenidos del paquete:

Gato. No.

Descripción del Producto

Volumen

G3331

Swescript RT I Kit de sinténtesis de cdNA First Strand (con removedor de GDNA)

50RXNS / 100RXNS

Componentes:

Número de componentes

Componente

G3331-50

G3331-100

G3331-1

Swescript rt i enzyme mezclaa

50UL

100UL

G3331-2

5x tampón de reacciónb

200UL

400UL

G3331-3

Oligo (DT) 18 Primer (100um)

50UL

100UL

G3331-4

Primer de hexamer aleatorio (100um)

50UL

100UL

G3331-5

Removedor de GDNA

50UL

100UL

G3331-6

Tampón de removedor de GDNA 10X

50UL

100UL

G3331-7

Agua libre de nucleases

1 ml

1 ml

Manual

1 PC

1 PC

a: Con inhibidor de RNase

b: Con mezcla DNTP y MG² +

Condición de almacenamiento:

Transporte de bolsa de hielo mojada; Almacenado a -20 Temperatura, válida por 12 meses.

Uso:

1. Eliminación del genoma

(1) la plantilla de ARN y el agua sin nucleasa se pusieron en hielo para derretirse para su uso posterior;

(2) Reacción de eliminación del genoma (Sistema de reacción de 10UL recomendado):

Componente

Volumen

Tampón de removedor de GDNA 10X

1ul

Removedor de GDNA

1UL

ARN total / ARNm

0.1 ng-5/10 pg-0.5UG

Agua libre de nucleases

Añadir a 10UL

(3) mezclar suavemente y centrifugar;

(4) incubar a 37 ℃ durante 2 minutos y luego poner hielo para su uso posterior;

2. Síntesis del primer cDNA de cadena.

(1) Preparación del sistema de reacción de transcripción inversa (se recomienda el sistema de reacción 20UL);

Componente

Volumen

En el paso anterior, el genoma eliminó el fluido de reacción.

10ul

5x tampón de reacción

4UL

Oligo (DT) 18 Primer (100um)

1UL

o imprimación de hexamer aleatorio (100um)

o 1ul

o imprimación específica del gen (2um)

o 1ul

Swescript rt i enzyme mezcla

1UL

Agua libre de nucleases

Añadir a 20UL

Nota: Para altas plantillas GC o complejas, la plantilla de ARN, los cebadores de transcripción inversa y el agua sin nucleasa se pueden mezclar por adelantado y luego se enfríen en hielo rápidamente después de mantenerse a 65 ℃ durante 5 min. Y luego agregas los otros componentes.

((2) mezclar suavemente y centrifugar;

(3) Configuración del programa de transcripción inversa:

La temperatura

Time

25 ℃ a

5 minutos

50 ℃ b

15-30 min

85 ℃

5 s

R: Por ejemplo, el cebador de hexamer aleatorio se selecciona y se incuba a 25 ℃ durante 5 min, luego se lleva a cabo la reacción posterior. Si elige usar OLIGO (DT) 18 cebador o imprimación específica del gen, puede reaccionar directamente a 50 ℃.

B: Para altas plantillas GC o complejas, la temperatura de transcripción inversa se puede elevar a 55.

Notas:

1. Por favor, use guantes desechables durante la operación para evitar la contaminación de RNase.

2. Los productos de transcripción inversa se pueden almacenar a -20 ℃ por un corto tiempo. Si se necesita almacenamiento a largo plazo, se recomienda almacenarlos a -80 después de empaquetar para evitar ciclos de congelación repetidos.

3. Si la plantilla es de origen eucariótico, se recomienda seleccionar oligo (DT) 18 cebador y emparejarlo con la cola de poli a 3 'de ARNm eucariótica para obtener el mayor rendimiento del ADNc de longitud completa.

4. Para la transcripción inversa del ARN procariótico, se debe usar el cebador de hexam más aleatorio o el cebador específico del gen.

5. El cebador de hexamer aleatorio tiene una amplia aplicabilidad y es adecuada para el ARNm, la RRNA, el ARNT, las plantillas de ARN pequeñas y LNCRNA.

6. Si la transcripción inversa, se le sigue el ensayo QPCR, el imprimador Oligo (DT) 18 cebador y el cebador de hexamer aleatorio se pueden mezclar para hacer que la eficiencia de síntesis de ADNc en todas las regiones del ARNm sea el mismo, lo que ayuda a mejorar la autenticidad y la repetibilidad de los resultados cuantitativos.

7. Si los cebadores QPCR posteriores están diseñados en Exones, se puede omitir el paso de eliminación del genoma.

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