Swescript RT II Kit de síntesis de cdNA de primer año

Introducción del producto:

Este producto utiliza la transcriptasa inversa mutada modificada para sintetizar la primera hebra de ADNc con ARN total o ARNm como plantilla para la transcripción inversa eficiente. El kit contiene todos los reactivos necesarios para sintetizar la primera cadena de ADNc con alta calidad, y proporciona dos tipos de cebadores de síntesis de ADNc para la opción: El cebador aleatorio HEXAMER PRIMER y OLIGO (DT) 18 Primer Sintetizan los productos de ADNc que pueden ser directamente Se utiliza para reacciones posteriores de PCR o QPCR. Swescript RT II (transcriptasa inversa) es una transcriptasa inversa mutante basada en M-MLV Transcriptasa inversa y obtenida a través de la detección evolutiva in vitro. Swescript RT II no tiene actividad RNASE H. La degradación de ARN en la plantilla de la hibridación de ADN / ARN durante la primera reacción de síntesis de cDNA de cadena se evitó, a fin de garantizar la cantidad y la longitud de la primera síntesis de ADNc de cadena. En comparación con la enzima de tipo salvaje y la primera generación de Swescript RT I, la segunda generación de Swescript RT II ha mejorado aún más la estabilidad térmica y la eficiencia de la síntesis de ADNc. Puede sintetizar eficientemente el ADNc en el rango de 42-65 ℃ y completar la reacción de transcripción inversa tan pronto como 5 min, especialmente adecuada para la transcripción inversa de ARN con estructura compleja.

Contenidos del paquete:

Componentes:

^a: Con inhibidor de RNase

^b: Con mezcla DNTP y MG² +

Condición de almacenamiento:

Transporte de bolsa de hielo mojada; Almacenado a -20 Temperatura, válida por 12 meses.

Uso:

El primer paso para la síntesis de ADNc.

1. Preparación del sistema de reacción de transcripción inversa (Sistema de reacción recomendado de 20UL)

Nota: Para altas plantillas GC o complejas, la plantilla de ARN, los cebadores de transcripción inversa y el agua sin nucleasa se pueden mezclar por adelantado y luego se enfríen en hielo rápidamente después de mantenerse a 65 ℃ durante 5 min. Y luego agregas los otros componentes de reacción.

2. mezclar suavemente y centrifugar;

3. Configuración del programa de transcripción inversa:

R: Por ejemplo, el cebador de hexamer aleatorio se selecciona y se incuba a 25 ℃ durante 5 minutos, luego se lleva a cabo la reacción posterior. Si elige usar el cebador OLIGO (DT) 18 PRIMER o GEN específico, puede realizar una reacción directa a 55;

B: Para plantillas de alta GC o complejos, la temperatura de transcripción inversa se puede elevar a 65.

Notas:

1. Por favor, use guantes desechables durante la operación para evitar la contaminación de RNase.

2. Los productos de transcripción inversa se pueden almacenar a -20 ℃ por un corto tiempo. Si se necesita almacenamiento a largo plazo, se recomienda almacenarlos a -80 después de empaquetar para evitar ciclos de congelación repetidos.

3. Si la plantilla es de origen eucariótico, se recomienda seleccionar oligo (DT) 18 cebador y emparejarlo con la cola de poli a 3 'de ARNm eucariótica para obtener el mayor rendimiento del ADNc de longitud completa.

4. Para la transcripción inversa del ARN procariótico, se debe usar el cebador de hexam más aleatorio o el cebador específico del gen.

5. El cebador de hexamer aleatorio tiene una amplia aplicabilidad y es adecuada para el ARNm, la RRNA, el ARNT, las plantillas de ARN pequeñas y LNCRNA.

6. Si la transcripción inversa, se le sigue el ensayo QPCR, el imprimador Oligo (DT) 18 cebador y el cebador de hexamer aleatorio se pueden mezclar para hacer que la eficiencia de síntesis de ADNc en todas las regiones del ARNm sea el mismo, lo que ayuda a mejorar la autenticidad y la repetibilidad de los resultados cuantitativos.