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Swescript RT II Kit de síntesis de cdNA de primer año

Estado de Disponibilidad:
  • G3332-50

Descripción del producto

Introducción del producto:

Este producto utiliza la transcriptasa inversa mutada modificada para sintetizar la primera hebra de ADNc con ARN total o ARNm como plantilla para la transcripción inversa eficiente. El kit contiene todos los reactivos necesarios para sintetizar la primera cadena de ADNc con alta calidad, y proporciona dos tipos de cebadores de síntesis de ADNc para la opción: El cebador aleatorio HEXAMER PRIMER y OLIGO (DT) 18 Primer Sintetizan los productos de ADNc que pueden ser directamente Se utiliza para reacciones posteriores de PCR o QPCR. Swescript RT II (transcriptasa inversa) es una transcriptasa inversa mutante basada en M-MLV Transcriptasa inversa y obtenida a través de la detección evolutiva in vitro. Swescript RT II no tiene actividad RNASE H. La degradación de ARN en la plantilla de la hibridación de ADN / ARN durante la primera reacción de síntesis de cDNA de cadena se evitó, a fin de garantizar la cantidad y la longitud de la primera síntesis de ADNc de cadena. En comparación con la enzima de tipo salvaje y la primera generación de Swescript RT I, la segunda generación de Swescript RT II ha mejorado aún más la estabilidad térmica y la eficiencia de la síntesis de ADNc. Puede sintetizar eficientemente el ADNc en el rango de 42-65 ℃ y completar la reacción de transcripción inversa tan pronto como 5 min, especialmente adecuada para la transcripción inversa de ARN con estructura compleja.

Contenidos del paquete:

Gato. No.

Descripción del Producto

Volumen

G3332

Swescript RT II Kit de síntesis de cdNA de primer año

50RXNS / 100RXNS

Componentes:

Número de componentes

Componente

G3332-50

G3332-100

G3332-1

MEZCLAZA DE ENZIMA RTIPT RT IIa

50UL

100UL

G3332-2

5 × tampón de reacciónb

200UL

400UL

G3332-3

Oligo (DT) 18 Primer (100um)

50UL

100UL

G3332-4

Primer de hexamer aleatorio (100um)

50UL

100UL

G3332-5

Agua libre de nucleases

1ml

1ml

Manual

1 PC

1 PC

a: Con inhibidor de RNase

b: Con mezcla DNTP y MG² +

Condición de almacenamiento:

Transporte de bolsa de hielo mojada; Almacenado a -20 Temperatura, válida por 12 meses.

Uso:

El primer paso para la síntesis de ADNc.

1. Preparación del sistema de reacción de transcripción inversa (Sistema de reacción recomendado de 20UL)

Componente

Volumen

5x tampón de reacción

4ul

Oligo (DT) 18 Primer (100um)

1UL

o imprimación de hexamer aleatorio (100um)

o 1ul

o imprimación específica del gen (2um)

o 1ul

Swescript rt i enzyme mezcla

1UL

ARN total / ARNm *

0.1 ng-5/10 pg-0.5UG

Agua libre de nucleases

Añadir a 20UL

Nota: Para altas plantillas GC o complejas, la plantilla de ARN, los cebadores de transcripción inversa y el agua sin nucleasa se pueden mezclar por adelantado y luego se enfríen en hielo rápidamente después de mantenerse a 65 ℃ durante 5 min. Y luego agregas los otros componentes de reacción.

2. mezclar suavemente y centrifugar;

3. Configuración del programa de transcripción inversa:

La temperatura

Time

25 ℃a

5 minutos

50 ℃b

15-30 min

85 ℃

5 s

R: Por ejemplo, el cebador de hexamer aleatorio se selecciona y se incuba a 25 ℃ durante 5 minutos, luego se lleva a cabo la reacción posterior. Si elige usar el cebador OLIGO (DT) 18 PRIMER o GEN específico, puede realizar una reacción directa a 55;

B: Para plantillas de alta GC o complejos, la temperatura de transcripción inversa se puede elevar a 65.

Notas:

1. Por favor, use guantes desechables durante la operación para evitar la contaminación de RNase.

2. Los productos de transcripción inversa se pueden almacenar a -20 ℃ por un corto tiempo. Si se necesita almacenamiento a largo plazo, se recomienda almacenarlos a -80 después de empaquetar para evitar ciclos de congelación repetidos.

3. Si la plantilla es de origen eucariótico, se recomienda seleccionar oligo (DT) 18 cebador y emparejarlo con la cola de poli a 3 'de ARNm eucariótica para obtener el mayor rendimiento del ADNc de longitud completa.

4. Para la transcripción inversa del ARN procariótico, se debe usar el cebador de hexam más aleatorio o el cebador específico del gen.

5. El cebador de hexamer aleatorio tiene una amplia aplicabilidad y es adecuada para el ARNm, la RRNA, el ARNT, las plantillas de ARN pequeñas y LNCRNA.

6. Si la transcripción inversa, se le sigue el ensayo QPCR, el imprimador Oligo (DT) 18 cebador y el cebador de hexamer aleatorio se pueden mezclar para hacer que la eficiencia de síntesis de ADNc en todas las regiones del ARNm sea el mismo, lo que ayuda a mejorar la autenticidad y la repetibilidad de los resultados cuantitativos.

G3332-50A

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